SAGE (Serial Analysis of Gene Expression)

• Génération d'ADNc double-brin via amorce poly(T) biotinylée.
• Digestion des ADNc par enzyme coupant en moyenne tous les 256 bases
• Partie 5' des ADNc récupérée par billes magnétiques couplées à une molécule de streptavidine
• Séparation en 2 lots
• Fixation d'un linker à l'extrémité des cDNA (linkers différents pour les 2 lots)
• Clivage par enzyme d'étiquetage, coupant 20 bases après l'extrémité (la taille du linker est ajustée de façon à conserver un bout d'ADNc de 10 bases)
• Ligation et amplification des fragments deux par deux (ditags) en utilisant les deux linkers comme amorce (assure que tous les fragments sont amplifiés dans la même façon).
• Les ditags sont séparés du linker puis concaténés.
• Les concaténats sont clonés et séquencés.

L'analyse des données de séquence est réalisée à l'aide d'un programme informatique.
Image tirée du SAGE Facility, University of Pittsburg.

Découverte de nouveaux gènes par SAGE: une étude SAGE du transcriptome de levure pendant 3 phases de croissance a permis de mettre en évidence 160 nouveaux gènes (Velculescu et al. 1997).